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    ELISA試劑樣本的實驗準備

    點擊次數(shù):1410  更新時間:2015-05-06

    前期準備

            利用ELISA試劑盒進行臨床檢驗常見的樣本一般包括血液(指

    血,靜脈血),尿,糞便,腦脊液,胸腹水,前列腺液,精液

    ,陰道分泌物等,這些樣本收集的時間、方法和保存都有一定

    的要求。

    樣本實驗準備
    在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成

    份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天就進行
    檢測的樣本,ELISA試劑盒及時儲存在4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本,及

    時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?,有條件的,-70℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

    標本應避免反復凍融。
        液體類標本:  包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、

    細胞培養(yǎng)上清等。
    1. 血清:
    室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000

    轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離

    心。
    2. 血漿:
    應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混

    合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收

    集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
    3. 尿液:
    用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收

    集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦

    脊液參照此實行。
    4. 細胞培養(yǎng)上清:
    檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000

    -3000轉/分)。仔細收集上清。
    5. 培養(yǎng)細胞
        檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液

    ,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白

    萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右

    (2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形

    成,應再次離心。
    6. 組織標本
        切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液

    氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入

    一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿

    器將標本勻漿化。ELISA試劑盒離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細

    收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

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